Η Δέσποινα Μακροπούλου γεννήθηκε στη Θεσσαλονίκη από μικρασιάτες γονείς το 1954. Τελείωσε το δημοτικό στη Σχολή Αγλαΐας Σχινά, το εξατάξιο γυμνάσιο στο Α´ Θηλέων Θεσσαλονίκης και παρακολούθησε μαθήματα θεάτρου στη δραματική σχολή του Χριστόφορου Μάλαμα. Το 1978 αποφοίτησε από το Τμήμα Αρχαιολογίας και Τέχνης της Φιλοσοφικής Σχολής του Α.Π.Θ. Είναι διδάκτωρ της Βυζαντινής Αρχαιολογίας στη Φιλοσοφική Σχολή του Ε.Κ.Π.Α. Εργάστηκε στην Ελληνική Αρχαιολογική Υπηρεσία για 36 χρόνια στην Αθήνα, Θεσσαλονίκη, Κιλκίς και Κομοτηνή. Διετέλεσε πρώτη διευθύντρια της νεοσύστατης Εφορείας Βυζαντινών Αρχαιοτήτων Θράκης (2006-2010) και στη συνέχεια της Εφορείας Βυζαντινών Αρχαιοτήτων Θεσσαλονίκης έως τον Οκτώβρη του 2014. Στην Εφορεία της Θεσσαλονίκης υπηρέτησε συνολικά 30 χρόνια ως Επιμελήτρια Αρχαιοτήτων και Έφορος. Οργάνωσε, διηύθυνε ή επέβλεψε περισσότερες από 120 ανασκαφές στην πόλη Θεσσαλονίκη και στους νομούς Κιλκίς, Ξάνθης, Ροδόπης και Έβρου, συνέγραψε πολυάριθμες μελέτες, έδωσε διαλέξεις και έλαβε μέρος σε συνέδρια στην Ελλάδα και το εξωτερικό. Σήμερα συνεχίζει να ασχολείται με τη ζωγραφική, τη γλυπτική και τη συγγραφή.